
1、SDS裂解液是一種比較強烈的細胞組織裂解液,常用于組織細胞中難溶蛋白的裂解。
2、本產品具有有強烈的蛋白變性作用,不能用于非變性蛋白方面的研究。
3、本產品裂解得到的蛋白樣品可用于常規的Western、ChIP(染色質免疫共沉淀,chromatin immunoprecipitation)等。
4、由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本產品裂解得到樣品的蛋白濃度。建議使用晶彩生物生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。
|
產品編號 |
JC-PL004 |
JC-PL005 |
JC-PL006 |
|
產品名稱 |
|||
|
裂解強度 |
溫和 |
強 |
溫和 |
|
對膜蛋白的提取 |
一般 |
很好 |
一般 |
|
對胞漿蛋白的提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
|
對核蛋白的提取 |
較好 |
很好 |
較好 |
|
胞漿磷酸化蛋白提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
|
細胞核轉錄因子提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
|
主要用途 |
WB, IP, co-IP |
WB, co-IP |
WB, IP ,co-IP |
原理:
陰離子去垢劑SDS促進細胞膜的崩解,特別適用于膜蛋白或者細胞骨架蛋白的裂解。
操作步驟:
對于培養細胞樣品:
1、融解SDS裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
2、對于貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150—250ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后,細胞就會被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續裂解10分鐘。
對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續裂解10分鐘。
3、充分裂解后,10000-14000rpm離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和ChIP等操作。
裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入150ul裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200ul或250ul。如果用于ChIP,建議6孔板每孔細胞至少加入200ul裂解液。
對于組織樣品:
1、把組織剪切成細小的碎片。
2、融解SDS裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
3、按照每20毫克組織加入150—250ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量);
4、用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續裂解10分鐘;
5、充分裂解后,10000-14000rpm離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和ChIP等操作;
6、如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
可以制備樣品數:
|
樣品種類 |
樣品來源 |
收獲細胞數 |
RIPA用量 |
可制備樣品數 |
|
細胞 |
6孔板 |
2.5*106 |
150-250ul |
400-600 |
|
60mm培養板 |
5.2*106 |
300-500ul |
200-300 |
|
|
90mm培養板 |
12.2*106 |
500-1000ul |
100-200 |
|
|
25cm2培養瓶 |
5*106 |
300-500ul |
200-300 |
|
|
75cm2培養瓶 |
2*107 |
1000-2000ul |
50-100 |
|
|
組織 |
20mg組織塊 |
|
150-250ul |
400-600 |