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網站首頁 > 試劑 > 蛋白提取

    SDS裂解液

    貨號:PL005
    廠家:晶彩
    • 介紹
    • 補充信息
    • 說明書

      1、SDS裂解液是一種比較強烈的細胞組織裂解液,常用于組織細胞中難溶蛋白的裂解。

      2、本產品具有有強烈的蛋白變性作用,不能用于非變性蛋白方面的研究。

      3、本產品裂解得到的蛋白樣品可用于常規的Western、ChIP(染色質免疫共沉淀,chromatin immunoprecipitation)等。

      4、由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本產品裂解得到樣品的蛋白濃度。建議使用晶彩生物生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。


      產品編號

      JC-PL004

      JC-PL005

      JC-PL006

      產品名稱

      NP-40裂解液

      SDS裂解液

      Western及IP細胞裂解液

      裂解強度

      溫和

      溫和

      對膜蛋白的提取

      一般

      很好

      一般

      對胞漿蛋白的提取

      很好

      很好

      很好

      對核蛋白的提取

      較好

      很好

      較好

      胞漿磷酸化蛋白提取

      很好

      很好

      很好

      細胞核轉錄因子提取

      很好

      很好

      很好

      主要用途

      WB, IP, co-IP

      WB, co-IP

      WB, IP ,co-IP

      原理:

         陰離子去垢劑SDS促進細胞膜的崩解,特別適用于膜蛋白或者細胞骨架蛋白的裂解。


      操作步驟:

      對于培養細胞樣品:
      1、融解SDS裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
      2、對于貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150—250ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后,細胞就會被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續裂解10分鐘。
      對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續裂解10分鐘。
      3、充分裂解后,10000-14000rpm離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和ChIP等操作。
      裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入150ul裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200ul或250ul。如果用于ChIP,建議6孔板每孔細胞至少加入200ul裂解液。


      對于組織樣品:
      1、把組織剪切成細小的碎片。
      2、融解SDS裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
      3、按照每20毫克組織加入150—250ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量);
      4、用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續裂解10分鐘;
      5、充分裂解后,10000-14000rpm離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和ChIP等操作;
      6、如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。


      可以制備樣品數:

      樣品種類

      樣品來源

      收獲細胞數

      RIPA用量

      可制備樣品數

      細胞

      6孔板

      2.5*106

      150-250ul

      400-600

      60mm培養板

      5.2*106

      300-500ul

      200-300

      90mm培養板

      12.2*106

      500-1000ul

      100-200

      25cm2培養瓶

      5*106

      300-500ul

      200-300

      75cm2培養瓶

      2*107

      1000-2000ul

      50-100

      組織

      20mg組織塊


      150-250ul

      400-600


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